THP-1基因敲除細(xì)胞是通過CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)實(shí)現(xiàn)的,用于研究免疫和炎癥相關(guān)機(jī)制。借助CRISPR/Cas9技術(shù)及雅吉生物的高效編輯服務(wù),科研人員可更精準(zhǔn)地進(jìn)行基因功能研究和藥物靶點(diǎn)篩選,為免疫疾病與感染治療開辟新思路例如,通過設(shè)計(jì)特定的sgRNA序列并將其與Cas9酶結(jié)合,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)THP-1細(xì)胞中目標(biāo)基因的敲除,從而研究基因功能及其在疾病中的作用
研究者可以通過以下步驟構(gòu)建基因敲除細(xì)胞:
設(shè)計(jì)并驗(yàn)證sgRNA序列,確保其能夠準(zhǔn)確引導(dǎo)Cas9酶切割目標(biāo)基因。
構(gòu)建表達(dá)載體,將sgRNA和Cas9基因克隆到載體中,并通過轉(zhuǎn)染方法導(dǎo)入THP-1細(xì)胞
通過篩選和克隆技術(shù)選擇成功敲除目標(biāo)基因的細(xì)胞亞群。
例如,已有研究成功利用CRISPR/Cas9技術(shù)在THP-1細(xì)胞中敲除了GPR108基因,并通過PCR和測(cè)序驗(yàn)證了敲除效果
。 此外,還有研究通過類似方法敲除了其他基因(如S100A9、KCNN4等),進(jìn)一步揭示了THP-1細(xì)胞在免疫反應(yīng)中的作用
THP-1基因敲除細(xì)胞為研究免疫調(diào)控、信號(hào)通路及疾病模型提供了重要工具
THP-1細(xì)胞基因敲除的標(biāo)準(zhǔn)流程(基于慢病毒技術(shù))
在THP-1細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效基因敲除,需經(jīng)過以下幾個(gè)核心步驟:
1.靶向設(shè)計(jì)與載體構(gòu)建:依據(jù)目標(biāo)基因的關(guān)鍵外顯子區(qū)域設(shè)計(jì)sgRNA,并構(gòu)建至慢病毒載體系統(tǒng)中;
2.慢病毒制備與細(xì)胞感染:使用HEK293T細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝,優(yōu)化感染MOI并借助Polybrene提高感染效率;
3.篩選與單克隆擴(kuò)增:利用抗生素篩選獲得Cas9穩(wěn)定表達(dá)株及sgRNA陽性克隆,并進(jìn)行單細(xì)胞克隆擴(kuò)增;
4.基因敲除驗(yàn)證:通過測(cè)序、酶切分析及Western blot驗(yàn)證目標(biāo)基因的敲除效率,確保純合克隆的獲得。
專業(yè)細(xì)胞基因編輯一站式服務(wù)商
高效率編輯:基因敲除效率高達(dá)80%,遠(yuǎn)超市場(chǎng)平均水平(常規(guī)方法效率10%-30%);
全面服務(wù)體系:涵蓋從sgRNA設(shè)計(jì)到敲除驗(yàn)證的全流程,支持敲除、點(diǎn)突變、敲入等多種定制化需求;
海量成功案例:已建立超過5000種基因編輯細(xì)胞株,廣泛應(yīng)用于炎癥、腫瘤、代謝等多個(gè)研究方向;
快速響應(yīng)交付:常規(guī)項(xiàng)目6周內(nèi)交付,緊急項(xiàng)目可加急處理,助力科研加速。
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