運(yùn)輸條件與最佳處理時間

1、常溫運(yùn)輸（20-25℃）

處理時間：≤24 小時

原因：常溫下細(xì)胞代謝活躍，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)（如葡萄糖、氨基酸）會快速消耗，同時乳酸、氨等代謝廢物積累，導(dǎo)致培養(yǎng)基 pH 下降（正常 pH 7.2-7.4，低于 6.8 時細(xì)胞活性顯著降低）。若超過 24 小時未處理，細(xì)胞可能因酸性環(huán)境或營養(yǎng)匱乏而死亡。

2、冰袋低溫運(yùn)輸（4-8℃）

處理時間：≤72 小時

原因：低溫可抑制細(xì)胞代謝（代謝速率降低 50%-70%），延緩營養(yǎng)消耗和廢物產(chǎn)生，但培養(yǎng)基中的谷氨酰胺仍會緩慢分解產(chǎn)生氨，且長時間低溫可能導(dǎo)致細(xì)胞骨架損傷或凋亡。一般建議在 3 天內(nèi)完成處理，若運(yùn)輸時間超過 72 小時，需提前聯(lián)系供應(yīng)商確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)。

3、恒溫 CO?運(yùn)輸（37℃+5% CO?）

處理時間：≤5 天

原因：恒溫 CO?環(huán)境可維持培養(yǎng)基 pH 穩(wěn)定，細(xì)胞能在接近培養(yǎng)箱的條件下存活較長時間，但培養(yǎng)基中的血清成分可能因長時間 37℃儲存而變質(zhì)，且細(xì)胞持續(xù)增殖可能導(dǎo)致融合度過高（如從 70% 升至 90% 以上），增加消化難度或引發(fā)接觸抑制。

細(xì)胞狀態(tài)與緊急處理情形

1、需立即處理的情況

培養(yǎng)基顏色異常：若培養(yǎng)基變?yōu)樯铧S色（酸性過強(qiáng)）或紫色（堿性過強(qiáng)），提示 pH 已超出細(xì)胞耐受范圍，需立刻更換新鮮培養(yǎng)基，避免細(xì)胞因酸堿失衡死亡。

培養(yǎng)基渾濁或出現(xiàn)絮狀物：可能是細(xì)菌或真菌污染，需立即在生物安全柜中觀察細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞貼壁良好且污染不嚴(yán)重，可嘗試用 PBS 洗細(xì)胞后更換培養(yǎng)基并添加抗生素（如青霉素 + 鏈霉素）；若污染嚴(yán)重，建議丟棄細(xì)胞并消毒操作環(huán)境。

細(xì)胞大量脫落或變圓：可能因運(yùn)輸震蕩、溫度波動或代謝紊亂導(dǎo)致細(xì)胞損傷，需盡快處理并觀察后續(xù)貼壁情況，必要時進(jìn)行細(xì)胞拯救（如降低消化時間、使用細(xì)胞拯救培養(yǎng)基）。

2、可暫緩處理的情況

運(yùn)輸時間短（如 < 12 小時）且細(xì)胞狀態(tài)良好：培養(yǎng)基顏色正常、細(xì)胞貼壁均勻，可暫時將細(xì)胞放入培養(yǎng)箱（37℃+5% CO?）靜置 1-2 小時，讓細(xì)胞適應(yīng)溫度后再進(jìn)行換液或傳代，避免因溫差刺激導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)激。

不同細(xì)胞類型的處理時間差異

細(xì)胞類型代謝特性建議處理時間注意事項(xiàng)

永生化細(xì)胞系

增殖快、代謝活躍

≤24 小時（常溫）

若處理延遲，細(xì)胞可能過度增殖至融合度 100%，導(dǎo)致接觸抑制或老化，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

原代細(xì)胞

增殖慢、對環(huán)境敏感

≤48 小時（低溫）

原代細(xì)胞存活率低，長時間運(yùn)輸后需優(yōu)先評估活性（如臺盼藍(lán)染色），并避免頻繁操作。

干細(xì)胞

對培養(yǎng)條件要求高

≤36 小時（低溫）

干細(xì)胞培養(yǎng)需專用培養(yǎng)基，到貨后若處理延遲，可能因分化或凋亡導(dǎo)致細(xì)胞特性改變。

標(biāo)準(zhǔn)處理流程與時間管理建議

到貨后立即執(zhí)行的步驟

30 分鐘內(nèi)：開箱檢查包裝是否完好，記錄運(yùn)輸溫度（如冰袋是否融化、恒溫箱溫度是否達(dá)標(biāo)），拍照留存細(xì)胞狀態(tài)（培養(yǎng)基顏色、細(xì)胞貼壁情況），消毒放入后培養(yǎng)箱穩(wěn)定2-3小時。

2-3小時后：顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)后，在生物安全柜中打開 T25 瓶：

若細(xì)胞貼壁良好、培養(yǎng)基清亮，可吸去部分舊培養(yǎng)基（保留2-3mL），補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基后放入培養(yǎng)箱，24 小時內(nèi)完成第一次換液。

若細(xì)胞密度較高（如融合度 > 80%），需立即進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞老化。

延遲處理的臨時保存方法

若因?qū)嶒?yàn)安排需延遲處理（如隔夜），可將細(xì)胞放入4℃冰箱臨時保存（最多12小時），并在保存前更換 1/2 體積的新鮮培養(yǎng)基，減少代謝廢物積累；但需注意：4℃保存僅為應(yīng)急措施，不可長期使用，以免細(xì)胞活性下降。

總結(jié)

最佳處理時間：常溫運(yùn)輸細(xì)胞應(yīng)在24 小時內(nèi)處理，低溫運(yùn)輸可放寬至72 小時內(nèi)，但需根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)靈活調(diào)整，出現(xiàn)異常（如培養(yǎng)基變色、污染）時需立即處理。

核心原則：細(xì)胞到貨后處理越及時，活性保留越完整，后續(xù)實(shí)驗(yàn)（如增殖、分化、轉(zhuǎn)染）的成功率越高。建議實(shí)驗(yàn)人員提前規(guī)劃時間，確保到貨后能快速響應(yīng)，避免因延誤導(dǎo)致細(xì)胞損失。